ミニオンたちの生きがいは最強最悪のボスに仕えること。
黄色い単細胞の生命体だった彼らは、長い時間をかけて進化していきながら、その時代の最強最悪のボスに仕えてきた。過去に仕えたボスは、Tレックスやドラキュラ、ナポレオンなどそうそうたる顔ぶれ、しかし、ずっと同じボスに仕え続けることは難しかった。ミニオンたちのドジのせいでボスが死んでしまうからだ。仕えるボスを探し求め、さまよい、たどり着いたのは無人の氷の洞窟。洞窟の中で独自の文化を築き上げるが、ボスがいない生活の中で、次第にミニオンたちは生きる気力を失っていく。
そんな中、1人のミニオン、ケビンが立ち上がった。仲間のために最強最悪のボスを見つけようと、危険な旅に出ることを決意したのだ。彼に同行するのはスチュアートと、ボブ。3人はボス探しの旅に出発。世界中を放浪するうちに、1968年、ニューヨークにたどり着く。
そこで3人は、フロリダ州オーランドで開催される「大悪党大会」のウワサをかぎつける。それは、毎年世界中から悪党が集まるコンベンション。大悪党大会で、ミニオンたちは史上初の女大悪党スカーレット・オーバーキルと出会い、新たなボスとして仕えることを決める。
スカーレットと共にイギリスへ向かうと、彼女の秘密基地ではスカーレットの夫でマッド・サイエンティストのハーブが帰りを待っていた。彼女はミニオンたちを子分として雇い、最初のミッションとして王冠を盗んでくることを指示する。3人は、王冠を手に入れるべく英国王室に忍び込むが、ひょんなことからボブが英国国王になることに。それを知ったスカーレットの欲望は次第に危険で狂信的なものになっていき……。
ミニオンたちの真の試練が今始まる――。

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